Corticogénèse
Diversité des cellules neuronales dans le développement et les pathologies du cerveau
Développement et Physiopathologie de l’œil
Plateformes
Plateformes techniques, administration et équipement
La plateforme d’imagerie de l’Institut des Neurosciences de Montpellier fait partie depuis sa création en 2004 de la plateforme régionale d’imagerie Montpellier Ressources Imagerie (MRI : www.mri.cnrs.fr). Elle réunit des compétences scientifiques et techniques dédiées à l’imagerie en neurosciences. En outre, la plateforme abrite différents appareils de pointe en microscopie d'échantillons fixés ou vivants, ainsi que des solutions d'analyse d'images. Elle est certifiée ISO 9001 : 2015 (LRQA) et labellisée IBISA (Infrastructures Biologie Santé et Agronomie : www.ibisa.net). La plateforme est ouverte aux laboratoires extérieurs publics et privés.
Nos missions sont multiples :
Mise à disposition de postes de microscopie et d'analyse d'images
Aide à la préparation et à l'observation des échantillons
Adaptation et mise au point de nouvelles applications
in vitro
et
in vivo
Automatisation du traitement d'images
Formation et enseignement
Expertise
1. MICROSCOPIE MULTI-PHOTONIQUE
ZEISS LSM 7MP / OPO
Microscope multi-photon sur statif droit ZEISS Axio Examiner. Système équipé d’un laser pulsé Coherent Chameleon Ultra II (longueurs d'onde entre 690 et 1010nm) couplé à un Chameleon Compact OPO (Optical Parametric Oscillator) de Coherent (longueurs d'onde entre 1050 et 1300nm). 4 détecteurs : 2 PMT NDD classiques et 2 PMT BiG avec comptage de photons possible. Contrôle environnemental avec enceinte thermostatée. Piloté par le logiciel ZEN.
Cet équipement est destiné à différentes applications d'imagerie multi-photonique :
Imagerie
in vivo
multi-dimensionnelle, multi-couleur
Imagerie sur petit animal
Fluorescence, Seconde Génération d'Harmonique, Troisième Génération d'Harmonique
Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS)
2. MICROSCOPIE A FEUILLE DE LUMIERE
ZEISS LightSheet Z1
Microscope à feuille de lumière complètement automatisé pour imagerie 3D très rapide de petits organismes vivants (type embryon) ou échantillons transparisés. Microscope équipé d'un bras d'illumination, d'un bras de détection (objectif 5x ou 20x) et de deux caméras sCMOS. Sources d'illumination : diodes laser 405nm, 488nm, 561nm ; possibilité de détecter du rouge lointain. Piloté par le logiciel ZEN.
Imagerie
in vivo
et imagerie d'échantillons clarifiés
Imagerie multi-dimensionnelle, multi-couleur
Rotation de l'échantillon jusqu'à 360°
Chambre d'incubation
ZEISS LSM 880 Airyscan
Microscope confocal à balayage laser avec un seul pinhole, sur statif inversé ZEISS Axio Observer. Ajustement de la bande détection à quelques nanomètres près. 3 détecteurs PMT dont un avec cathode GaAsP, beaucoup plus sensible + 1 détecteur PMT pour lumière transmise. Module Airyscan pour augmenter le SNR et la résolution, option Fast Airyscan. Excitation avec laser ou diodes laser : 405nm, 440nm, 458nm, 488nm, 514nm, 561nm, 633nm. Piloté par le logiciel ZEN.
Échantillons fixés
Imagerie multi-dimensionnelle, multi-couleur
Imagerie haute résolution
Système intégralement motorisé
ZEISS LSM 700
Microscope confocal à balayage laser avec un seul pinhole, sur statif inversé ZEISS Axio Observer. Présence d'un dichroïque secondaire (VSD : Variable Secondary Dichroic de 400 à 700 nm) permettant d'ajuster la bande de détection de la fluorescence. 2 détecteurs PMT. Excitation avec diodes laser : 405nm, 488nm, 555nm, 639nm. Piloté par le logiciel ZEN.
Échantillons fixés
Imagerie multi-dimensionnelle, multi-couleur
Système intégralement motorisé
4. MICROSCOPIE A CHAMP LARGE
ZEISS AXIO IMAGER Z2 - module APOTOME 2.0
Microscope sur statif droit ZEISS Axio Imager Z2 motorisé, équipé d'un module Apotome pour faire du sectionnement optique en fluorescence et d'une caméra sCMOS Hamamatsu Orca flash 4.0 LT (Noir & Blanc, 16 bits, haute sensibilité). Filtres disponibles : Dapi/Hoechst, GFP, Cy3, dsRed, Cy5. Piloté par le logiciel ZEN.
Échantillons fixés entre lame et lamelle
Sectionnement optique : module Apotome
ZEISS 'Cell Observer' AXIO OBSERVER
Microscope sur statif inversé ZEISS Axio Observer motorisé, équipé d'une caméra sCMOS Hamamatsu Orca flash 4.0 LT (Noir & Blanc, 16 bits, haute sensibilité). Contrôle environnemental avec enceinte thermostatée. Filtres disponibles : Dapi/Hoechst, GFP, Cy3 avec source diode ; lumière blanche/transmise. Tous types de montages : lames, boîtes de Petri, boîtes multi-puits, … Piloté par le logiciel ZEN.
Échantillons vivants ou fixés
Longues acquisitions (jusqu'à plusieurs jours)
ZEISS AXIOVERT 200M (non-MRI)
Station développée sur la base d'un statif inversé ZEISS Axiovert 200M, un changeur de longueur d'ondes rapide (Sutter Lambda DG-4) et un caméra CoolSnap ES. Le système permet d'observer la réponse de plusieurs neurones en même temps, avec une fréquence de 3-4 images par seconde. Piloté par le logiciel MetaFluor.
Échantillons vivants
Imagerie calcique
Perfusion du milieu
ZEISS AXIOSCAN Z1
Système d'imagerie à haut rendement (automate), essentiellement dédié à l'immunofluorescence (caméra Hamamatsu Orca flash 4.0, Noir & Blanc), acquisition possible de marquages histologiques avec une caméra couleur Hitachi. Acquisition automatique jusqu'à 100 lames. 7 LEDs disponibles : 385nm, 435nm, 475nm, 515nm, 555nm, 590nm, 635nm. Piloté par le logiciel ZEN.
Batch de lames d'immunofluorescence
6. MACROSCOPIE
Loupe binoculaire ZEISS Discovery.V20 (système non intégré à MRI) pour observation de gros échantillons (petits organismes, coupes entières de tissus…), avec acquisition possible d'images. Grand champ d'observation et grande distance de travail. Piloté par le logiciel Axiovision.
Fond clair
Fond noir
Fluorescence
LED transmitted illumination
LED reflected brightfield illumination
7. ANALYSES D’IMAGES
Station dédiée à l'analyse d'images, assez puissante pour permettre l'exploitation d'images de plusieurs dizaines de GB. Logiciels : Fiji/ImageJ, Imaris, Volocity, Huygens, Definiens. La plateforme propose tout particulièrement son expertise pour le traitement et l'analyse d'images sous Definiens.
Déconvolution
Visualisation et/ou reconstruction des images 3D
Quantification
Segementation
Colocalisation
Tracking
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Sensation
Neuropeps
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Protéinopathies
Corticogenèse
Œil
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Hôpital Saint Eloi - Bâtiment INM
80, rue Augustin Fliche - BP 74103
34091 Montpellier cedex 5 - France
Tel.: (33) (0)4 99 63 60 00
Fax: (33) (0)4 99 63 60 20
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