诱变育种
发展简史
1927年美国H.J.马勒发现
X射线
能引起
果蝇
发生
可遗传的变异
。1928年美国L.J.斯塔
特勒
证实X射线对玉米和大麦有诱变效应。此后,瑞典H.
尼尔松
-埃赫勒和A.
古斯塔夫森
在1930年利用辐射得到了有实用价值的大麦突变体;D.托伦纳在1934年利用X射线育成了优质的烟草品种“赫洛里纳”。1942年,C.奥尔巴克发现
芥子气
能导致类似X
射线
所产生的各种突变,1948年A.古斯塔夫森用芥子气诱发大麦产生突变体。50年代以后,诱变育种方法得到改进,成效更为显著,如美国用X 射线和中子引变,育成了用杂交方法未获成功的抗枯萎病的
胡椒薄荷
品种Todd's Mitcham等。70年代以来,诱变因素从早期的
X射线
发展到
γ射线
、
中子
、多种
化学诱变剂
和
生理活性物质
,诱变方法从单一处理发展到复合处理,同时,诱变育种与
杂交育种
、
组织培养
等密切结合,大大提高了诱变育种的实际意义。
中国在宋朝宣和年间曾有用药物处理
牡丹
的根,从而诱发花色变异的记载。但用现代方法进行诱变育种,则始于50年代后期。1965年以后各地陆续用此法育成了许多优良品种投入生产。据1985年的不完全统计,诱变育成的农作物优良品种有190多个。
我们知道,常规助杂交育种基本上是染色体的重新组合,这种技术一般并不引起染色体发生变异,更难以触及到基因。而辐射的作用则不同,它们有的是与细胞中的原子、分子发生冲撞、造成电离或激发;有的则是以能量形式产生光电吸收或
光电效应
;还有的能引起细胞内的一系列理化过程。这些都会对细胞产生不同程度的伤害。对染色体的数目、结构等都会产生影响,使有的
染色体断裂
了;有的丢失了一段,有的断裂后在“自我修复”的过程中头尾接倒了或是“张冠李戴”分别造成染色体的
倒位
和易位。当然射线也可作用在染色体核苷酸分子的碱塞上,从而使基因(
遗传密码
)发生突变。至于化学诱变,有的药剂是用其烷基置换其它分子中的氢原子,也有的本身是核苷酸碱基的类似物,它可以“鱼目混珠”,造成DNA复制中的错误。无疑这些都会使植物的基因发生突变。理、化因素的
诱导作用
,使得
植物细胞
的
突变率
比平时高出千百倍,有些变异是其它手段难以得到的。当然,所产生的变异绝大多数不能遗传,所以,辐射后的早代一般不急于选择。
但是,可遗传的好性状一经获得便可育成品种或种质资源。据世界原子能机构1985年统计,当时世界各国通过诱变已育成500多个品种,还有大量有价值的种质资源。中国的诱变育种同样成绩斐然,在过去的几十年中,经诱变育成的品种数一直占到同期育成品种总数的10%左右。如水稻品种原丰早,小麦品种山农辐63,还有玉米的鲁
原单
4号、大豆的铁丰18、棉花的鲁棉I号等都是通过诱变育成的。当然与其它技术一样,诱变育种也有自身的弱点:一是诱变产生的有益突变体频率低;二是还难以有效地控制变异的方向和性质;另外,诱发并鉴定出
数量性状
的
微突变
比较困难。因此,诱变育种应该与其它技术相结合,同时谋求技术上的自我完善。
诱变育种
物理诱变
应用较多的是
辐射诱变
,即用
α射线
、
β射线
、
γ射线
、Χ射线、中子和其他
粒子
、
紫外辐射
以及
微波辐射
等物理因素诱发变异。当通过辐射将
能量传递
到生物体内时,生物体内各种分子便产生电离和激发,接着产生许多
化学性质
十分活跃的自由原子或自由基团
。它们继续相互反应,并与其周围物质特别是
大分子
核酸和蛋白质反应,引起分子结构的改变。由此又影响到细胞内的一些
生化过程
,如DNA合成的中止、各种酶活性的改变等,使各部分结构进一步深刻变化,其中尤其重要的是
染色体损伤
。由于
染色体断裂
和重接而产生的染色体结构和数目的变异即
染色体突变
,而DNA分子结构中
碱基
的变化则造成
基因突变
。那些带有染色体突变或基因突变的细胞,经过细胞世代将变异了的
遗传物质
传至性细胞或
无性繁殖
器官,即可产生生物体的
遗传变异
。
目前一种新型高效的物理诱变方法——氦气
常压室温等离子体
诱变育种技术广泛应用于细菌、真菌、放线菌、霉菌、藻类、大型真菌、植物及
动物细胞
。以高纯氦气为工作气体,利用射频辉光放电原理,在常温常压状态下产生高能量的
等离子体
,其富含的高能化学活性粒子能够对菌株/植物/动物细胞产生高强度遗传物质损失,进而利用细胞启动的SOS高容错率修复机制,产生种类多样的错配位点,最终形成了遗传稳定、种类丰富的突变株。研究发现,由于
氦气
是最小的单原子分子,其激发后释放出来的活性粒子能量最高,达到19.8eV,而其他气体等离子体的活性粒子能量均比氦等离子体低很多。
诱变处理的材料宜选用综合性状优良而只有个别缺点的品种、
品系
或杂种。由于材料的
遗传背景
和对
诱变因素
的反应不同,出现有益突变的难易各异,因此进行诱变处理的材料要适当多样化。由于不同科、属、种及不同品种植物的
辐射敏感性
不同,其对诱变因素反应的强弱和快慢也各异。如十字花科白菜的敏感性小于禾本科的水稻、大麦,而水稻、大麦的敏感性又小于豆科的大豆。另外,辐射敏感性的大小还同植物的倍数性、
发育阶段
、生理状态和不同的器官组织等有关。如二倍体植物大于多倍体植物,大粒种子大于小粒种子,幼龄植株大于老龄植株,萌动种子大于休眠种子,性细胞大于体细胞等。根据
诱变因素
的特点和
作物
对诱变因素敏感性的大小,在正确选用处理材料的基础上,选择适宜的诱变剂量是诱变育种取得成效的关键(表1)。适宜诱变剂量是指能够最有效地诱发作物产生有益突变的剂量,一般用
半致死剂量
(
LD50
)表示。不同诱变因素采用不同的剂量单位。Χ、
γ射线
线吸收剂量以拉德(rad)或
戈瑞
(GY)为单位,
照射剂量
以
伦琴
(R)为单位,
中子
用注量表示。同时要注意单位时间的照射剂量(剂量率、
注量率
)以及处理的时间和条件。
辐照
方法分外照射和
内照射
两种,前者指被照射的植物接受来自外部的
γ射线源
、Χ射线源或
中子源
等辐射源辐照,这种方法简便安全,可进行大量处理。后者指将
放射性物质
(如32P、35S等)引入植物体内进行辐照,此法容易造成污染,需要防护条件,而且被吸收的剂量也难以精确测定。干种子因便于大量处理和便于运输、贮藏,用于辐照最为简便。
诱变育种
化学诱变
化学诱变主要用于处理种子,其次为处理植株。种子处理时,先在水中浸泡一定时间,或以干种子直接浸在一定浓度的
诱变剂
溶液中处理一定时间,水洗后立即播种,或先将种子干燥、贮藏,以后播种。植株处理时,简单的方法是在
茎秆
上切一浅口,用
脱脂棉
把诱变剂溶液引入植物体,也可对需要处理的器官进行注射或涂抹。应用的
化学诱变剂
浓度要适当(表2)。
处理时间
以使受处理的器官、组织完成
水合作用
和能被诱变剂所浸透为度。化学诱变剂大都是潜在的致癌物质,使用时必须谨慎。
经诱变处理产生的诱变一代,以M1表示。由于受射线等
诱变因素
的抑制和损伤,M1的发芽率、出苗率、成株率、结实率一般较低,发育延迟,植株矮化或畸形,并出现
嵌合体
。但这些变化一般不能遗传给后代。诱变引起的
遗传变异
多数为隐性,因此M1一般不进行选择,而以单株、单穗或以处理为单位收获。诱变二代(M2)是变异最大的世代,也是选择的关键时期,可根据育种目标及性状遗传特点选择优良单株(穗)。多数变异是不利的,但也能出现早熟、杆矮、抗病、抗逆、品质优良等有益变异,变异频率约为0.1~0.2%。诱变三代(M3)以后,随着世代的增加,
性状分离
减少,有些性状一经获得即可迅速稳定。经过几个世代的选择就能获得稳定的优良突变系,再进一步试验育成新品种。具有某些突出性状的突变系,还可用作杂交亲本
Walid A Lotfy,Khaled MGhanem,Ehab R El-Helow.Citricacid production by a novel Aspergillus niger isolate:1.Mutagenesis and cost reduction studies. Bioresource Technology . 200
徐冠仁
.植物诱变育种学
.北京
:中国农业出版社
,1996.5
:1-492